Анализ активности эндотоксина (ААЭ) является первым и единственным количественным анализом, утвержденным Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) и контролирующими органами ЕС для измерения эндотоксина в крови пациента. Эндотоксин – это уникальная молекула, образованная только одной грам-отрицательной бактерией. При попадании в кровоток эндотоксин вызывает сильную реакцию системного воспаления и может привести к сепсису.
Для пациентов с подозрением на сепсис терапевтические решения принимаются на основании оценки физиологических параметров, таких как повышенная температура тела и повышенный уровень лейкоцитов в крови при отсутствии объективных признаков инфекции или эндотоксикоза. Являясь быстрым и надежным методом количественного анализа, ААЭ позволяет врачам проверять образцы цельной крови и измерять содержание эндотоксина с высокой степенью чувствительности.
Сепсис – это критическое терапевтическое состояние, тяжесть которого сильно зависит от времени с момента начала заболевания и требует быстрого реагирования у нестабильных пациентов. Чем больше информации – тем лучше клинические решения. Сепсис – смертельно опасное заболевание, в зависимости от степени тяжести летальный исход составляет 20-60% пациентов. Сепсис является важной статьей бюджета системы здравоохранения, ожидается, что в будущем эти расходы увеличатся еще больше.
Предоставляя надежную, критичную во времени информацию, ААЭ помогает врачам выявить пациентов с высоким риском развития тяжелого сепсиса. Раннее распознавание пациентов с сепсисом и раннее вмешательство с целью назначения направленного лечения обеспечивает значительные преимущества метода с точки зрения благоприятного исхода для пациента.
Эндотоксин хорошо известен как липополисахарид. Липидная часть А эндотоксина такая же, как у всех видов грам-отрицательных бактерий, которые являются мишенью в анализе активности эндотоксина. Имеется два потенциальных источника эндотоксина в кровотоке. Первый – это инфицирование грам-отрицательными бактериями, второй – попадание эндотоксина из желудочно-кишечного тракта. Эндотоксикоз или наличие эндотоксина в кровотоке является мощным средством активации такой патологии, как сепсис.
Основным реагентом ААЭ являются антиэндотоксинные антитела – иммуноглобулин М. Если эндотоксин присутствует в образце крови, он распознается и связывается антителами, после чего доставляется к нейтрофилам через комплементные рецепторы. В присутствии зимозана нейтрофилы пациента подвергаются усиленному респираторному взрыву, который определяется методом люминольной хемолюминисценции. Количество испускаемого света пропорционально количеству эндотоксина, присутствующего в образце крови.
Образец крови пациента вносится в три пробирки для определения уровня активности эндотоксина. В пробирке 1 измеряется активность на исходном уровне неспецифичного окислительного взрыва нейтрофилов пациента при отсутствии специфичных антиэндотоксинных антител – это активность нейтрофилов на исходном уровне для конкретного пациента. В пробирке 3 измеряется максимальный окислительный взрыв нейтрофилов пациента в ответ на избыток экзогенного эндотоксина – это максимальная активность нейтрофилов для конкретного пациента. Пробирки 1 и 3 используются в качестве средства внутреннего контроля. В пробирке 2 выполняется измерение образца и измеряется окислительный взрыв в ответ на антиэндотоксинные антитела.
Испускание света из трех пробирок улавливается хемилюминометром, который, как видно на рисунке, отмечает три точки на графике. Этот прибор рассчитывает уровень активности эндотоксина и отображает результаты в виде активности эндотоксина или в единицах ААЭ. Такова сущность анализа активности эндотоксина.
Система ААЭ поставляется в виде набора. В каждом наборе для анализа активности эндотоксина содержится 20 ААЭ тестов, упакованных в 4 лотка, вложенных в пакет из фольги, два флакона с реагентами для анализа активности эндотоксина и инструкция по применению. В каждом наборе ААЭ содержится индивидуально упакованный тест контроля качества.
Весь набор ААЭ следует хранить при температуре 2-8 градусов Цельсия. В качестве альтернативы, если место для хранения в холодильнике вашего учреждения ограничено, можно хранить в нем только два флакона с реагентами ААЭ, поскольку невскрытые пакеты из фольги можно хранить при комнатной температуре.
Анализ активности эндотоксина выполняется с дублированием – в каждом лотке ААЭ содержится 5 пар тестов. Каждый ААЭ тест состоит из пробирки 1 (контроль), пробирки 2 (образец) и пробирки 3 (максимум) – по два экземпляра каждой пробирки, плюс одна аликвотная пробирка для хранения крови и 1 пробирка LPS Max, содержащая экзогенный эндотоксин.
Образцы крови пациентов должны собираться в стерильные пробирки для сбора крови, содержащие антикоагулянт ЭДТА, и перед использованием должны храниться при комнатной температуре.
Перед началом анализа активности эндотоксина проверьте срок годности продукта и убедитесь, что хемолюминометр Berthold SmartLine включен, а инкубатор с мешалкой прогрет до 37 0 C.
Для выполнения оставшихся анализов поместите лоток обратно в пакет из фольги, закройте его и храните при температуре 2-8 градусов Цельсия до 30 суток.
Анализ активности эндотоксина позволяет измерять эндотоксин в крови пациента. Анализ утвержден FDA США и контролирующими органами ЕС для оценки риска возникновения тяжелого сепсиса, и утвержден ЕС для исключения грам-отрицательных инфекций.
Результаты анализа ААЭ отображаются в единицах ААЭ.
Менее 0,40 единиц ААЭ – низкий уровень активности эндотоксина представляет низкий риск развития тяжелого сепсиса и исключает возникновение грам-отрицательных инфекций.
0,40 – 0,59 единиц ААЭ – средний уровень активности эндотоксина представляет повышенный риск развития тяжелого сепсиса.
Значение, большее или равное 0,60 единиц ААЭ – высокий уровень активности эндотоксина представляет высокий риск развития тяжелого сепсиса.
Анализ активности эндотоксина предназначен для помощи в оценке риска развития тяжелого сепсиса у пациента в первые, критически важные часы, с последующей передачей пациента в отделение интенсивной терапии. Результаты анализа наиболее полезны, когда рассматриваются в контексте общего клинического состояния пациента.
У пациентов с высоким уровнем активности эндотоксина в первый день поступления в отделение интенсивной терапии, риск развития тяжелого сепсиса в последующие 24 часа в три раза выше, чем у пациентов с низкими значениями результатов анализа ААЭ.
Анализ активности эндотоксинов не предназначен для дифференциальной диагностики текущего состояния сепсиса. Для определения точного первичного диагноза и вторичных причин эндотоксикоза требуются дополнительные клинические и диагностические меры, и соответствующая терапия.
Использование хемолюминисцентного анализа цельной крови, в котором образцы крови каждого пациента используются в качестве контрольного образца для этого же пациента, является простым, чувствительным и более точным методом отображения истинного уровня эндотоксина в крови.
Предоставляя надежную, критичную во времени информацию, ААЭ позволяет врачам быстро определить уровень эндотоксикоза и помогает выявить пациентов с высоким риском развития тяжелого сепсиса. Поздние последствия сепсиса, в том числе функциональная недостаточность многих органов и смерть, могут быть предотвращены благодаря раннему вмешательству.
ААЭ является единственным количественным анализом, утвержденным FDA для измерения эндотоксина в кровотоке и является важным шагом вперед в измерении такого сложного анализируемого образца.
Ключ к успеху в точном диагнозе!